Laboratorijski testi za diagnosticiranje COVID-19, ki so trenutno v praksi, kot svetujejo mednarodna strokovna telesa, se pregledajo in ovrednotijo.
COVID-19 Bolezen, ki izvira iz Wuhana na Kitajskem, je do zdaj prizadela več kot 208 držav. Znanstvena skupnost po vsem svetu je bila v zadnjih mesecih postavljena pred pomemben izziv, da se razvije diagnostični testi za Covid-19 odkrivanje bolezni za pregled bolnikov in osumljenih posameznikov za učinkovito obvladovanje in nadzor pandemije.
Preden ocenimo trenutne metode in prakse, ki se uporabljajo za odkrivanje COVID-19, najprej razumemo, kaj povzroča COVID-19 in kako razviti diagnostične teste za odkrivanje bolnikov za to bolezen. Bolezen COVID-19 povzroča pozitivno napeta RNA virus ki so zoonoza, kar pomeni, da lahko prečkajo vrste ovir od živali do ljudi in lahko pri ljudeh povzročijo bolezni, ki segajo od navadnega prehlada do hujših bolezni, kot sta MERS in SARS. Virus, ki povzroča COVID-19, je Mednarodni odbor za taksonomijo virusov (ICTV) zdaj poimenoval SARS-CoV-2, saj je zelo podoben tistemu, ki je povzročil izbruh SARS (SARS-CoV). Diagnostični test za bolezen COVID-19 je mogoče razviti na več načinov.
Najbolj priljubljena in trenutno sprejeta metoda po vsem svetu je razvoj diagnostičnega testa, ki lahko zazna sam virus SARS-CoV-2. tole Test temelji na odkrivanju virusnega genoma v vzorcu pacienta z RT-real time PCR (reverzna transkriptaza-real time Polymerase Chain Reaction). To vključuje pretvorbo virusne RNA v DNK z uporabo encima, imenovanega reverzna transkriptaza, in nato pomnoževanje DNK z uporabo posebnega niza začetnikov in fluorescenčne sonde, ki se vežejo na specifično regijo virusne DNK, z uporabo Taq polimeraze in zaznavanja fluorescenčnega signala. Ti testi se imenujejo NAAT (Testi pomnoževanja nukleinskih kislin). Ta tehnika je lahko zelo uporabna za zelo zgodnje odkrivanje prisotnosti nukleinske kisline v vzorcu pacienta, tudi pri asimptomatskih bolnikih, ki ne kažejo simptomov bolezni COVID-19 (zlasti v inkubacijskem obdobju 14-28 dni) in v poznejšem delu. tudi, ko je bolezen v polnem razmahu.
Različna podjetja po svetu so v zadnjih nekaj mesecih delala v tekmi s časom, da bi razvila diagnostični test na podlagi NAAT za odkrivanje SARS-CoV-2 na podlagi CDC (Centre for Disease Control), Atlante, ZDA in smernic WHO ( 1, 2). Zdravstvene oblasti po vsem svetu so te teste odobrile za uporabo v nujnih primerih za odkrivanje SARS-CoV-2. Doslej ciljani virusni geni vključujejo gene N, E, S in RdRP, skupaj z ustreznimi pozitivnimi in negativnimi kontrolami. Vzorci bolnikov, ki jih je treba odvzeti za tak test, so iz zgornjih dihalnih poti (bris nazofaringealnega in orofaringealnega trakta) in/ali spodnjih dihalnih poti (sputum in/ali endotrahealni aspirat ali bronhoalveolarno izpiranje). Vendar pa je virus mogoče odkriti tudi v drugih vzorcih, vključno z blatom in krvjo. Vzorce je treba hitro zbrati na ustrezen način ob upoštevanju vseh potrebnih previdnostnih ukrepov in ob upoštevanju praks biološke varnosti (v skladu s smernicami, ki jih je določila WHO[1]), pri bolnikih, ki izpolnjujejo opredelitev domnevnega primera za COVID-19, jih shraniti in zapakirati. dobro, če ga je treba prepeljati v diagnostični center in nato hitro obdelati (ekstrahiranje RNA v omari za biološko varnost v BSL-2 ali enakovrednem objektu) na način, da se zagotovi celovitost vzorca. Vse to je treba izvajati prednostno za boljše klinično vodenje in nadzor izbruhov.
Čas odkrivanja za različne razpoložljive teste, ki temeljijo na NAAT, ki so jih razvila velika diagnostična podjetja po vsem svetu, se giblje od 45 minut do 3.5 ure. Različne izboljšave se izvajajo pri teh testih, da bi jih pretvorili v teste oskrbe in dosegli želene rezultate v čim krajšem času, ne da bi pri tem ogrozili natančnost rezultata, da bi povečali število testov, ki jih je mogoče opraviti v enem dnevu.
Druge možnosti diagnostičnih testov so hitri diagnostični testi (RDT) ki bodisi odkrijejo virusne antigene/beljakovine, ki se izražajo na površini delcev virusa SARS-CoV-2, ko se razmnožujejo v gostiteljskih celicah in povzročajo bolezen ali gostiteljska protitelesa kot odziv na okužbo; ta test odkrije prisotnost protiteles v krvi ljudi, za katere se domneva, da so bili okuženi s COVID-19 (3).
Natančnost in ponovljivost RDT za odkrivanje virusnih antigenov je odvisna od več dejavnikov, vključno s časom od začetka bolezni, koncentracijo virusa v vzorcu, kakovostjo in obdelavo vzorca ter formulacijo reagentov, prisotnih v testnih kompletih. Zaradi teh spremenljivk se lahko občutljivost teh testov razlikuje od 34 % do 80 %. Glavna pomanjkljivost te možnosti je, da mora biti virus v svoji replikacijski in infektivni fazi, da odkrije virusne beljakovine.
Podobno testi za odkrivanje gostiteljskih protiteles temeljijo na moči odziva protiteles, ki je odvisna od dejavnikov, kot so starost, prehranski status, resnost bolezni in nekatera zdravila ali okužbe, ki zavirajo imunski sistem. Velika pomanjkljivost te možnosti je, da se protitelesa proizvajajo v dneh do tednih po okužbi z virusom SARS-CoV-2 in je treba čakati toliko časa, da opravimo test. To pomeni, da bo diagnoza okužbe s COVID-19 na podlagi odziva protiteles gostitelja pogosto možna šele v fazi okrevanja, ko je veliko možnosti za klinično intervencijo ali preprečevanje prenosa bolezni že minilo.
Trenutno so bili zgoraj omenjeni RDT zaradi pomanjkanja podatkov odobreni le v raziskovalnem okolju in ne za klinično diagnozo (3, 4). Ker bo na voljo vedno več epidemioloških podatkov za COVID-19, bo več RDT razvitih in odobrenih kot testov za oskrbo v kliničnem okolju, saj lahko dajo rezultate v 10-30 minutah v nasprotju s testi, ki temeljijo na NAAT, ki v povprečju trajajo nekaj ur za odkrivanje bolezni.
***
Reference:
1. WHO, 2020. Priporočila strategije laboratorijskega testiranja za COVID-19. Začasne smernice. 21. marec 2020. Dostopno na spletu na https://apps.who.int/iris/bitstream/handle/10665/331509/WHO-COVID-19-lab_testing-2020.1-eng.pdf Dostop 09. aprila 2020
2. CDC 2020. Informacije za laboratorije. Začasne smernice za laboratorije, na voljo na spletu na https://www.cdc.gov/coronavirus/2019-nCoV/lab/index.html Dostop 09. aprila 2020.
3. WHO, 2020. Nasveti o uporabi testov na mestu oskrbe. Znanstveni povzetek. 08. aprila 2020. Na voljo na spletu na https://www.who.int/news-room/commentaries/detail/advice-on-the-use-of-point-of-care-immunodiagnostic-tests-for-covid-19 Dostop 09. aprila 2020.
4. ECDC, 2020. Pregled stanja hitrega testiranja za diagnozo COVID-19 v EU/EGP. 01. april 2020 Evropski center za preprečevanje in nadzor bolezni. Na voljo na spletu na https://www.ecdc.europa.eu/en/publications-data/overview-rapid-test-situation-covid-19-diagnosis-eueea Dostop 09. aprila 2020
***
