Čas preizkusa se znatno skrajša s približno ene ure na nekaj minut z novo prijavljeno metodo RTF-EXPAR, ki uporablja pristop brez reverzne transkriptaze (RTF) za pretvorbo RNA v DNA sledi EXPAR (eksponencialna reakcija ojačanja) za ojačanje pri eni sami temperaturi.
Nadzor hitrosti Covid-19 širjenje zahteva natančno in hitrejšo strategijo testiranja virusov. RT-PCR (verižna reakcija polimeraze z reverzno transkriptazo), je najbolj natančna metoda testiranja, ki se trenutno uporablja, dvostopenjski test, ki traja približno 60 minut na vzorec.
Raziskovalci z Univerze v Birminghamu so poročali o novi metodi za odkrivanje SARS-CoV-2. To bi lahko omogočilo veliko hitrejše testiranje in je dovolj občutljivo.
Odkrivanje virusne RNA z RT-PCR (verižna reakcija s polimerazo reverzne transkriptaze) vključuje pretvorbo virusne RNA v komplementarno DNK (cDNA), čemur sledi pomnoževanje cDNA s kvantitativnim PCR (qPCR). cDNA nato odkrijemo s fluorescenčnim barvilom. To traja do eno uro.
Čas preizkusa se znatno skrajša s približno ene ure na nekaj minut z novo prijavljeno metodo RTF-EXPAR, ki uporablja pristop brez reverzne transkriptaze (RTF) za pretvorbo RNA v DNA sledi EXPAR (eksponencialna reakcija ojačanja) za ojačanje pri eni sami temperaturi. Pomnoževanje, ki poteka pri eni sami temperaturi, je ključ do hitrosti, saj se izogne dolgotrajnim korakom segrevanja in ohlajanja RT-PCR. Poleg tega je del pomnožene DNK manjši v primerjavi z RT-PCR. Tako EXPAR v nekaj minutah ustvari do 108 verig produkta DNK. Tvorbo dupleksa spremljamo, tako kot pri metodi RT-PCR, s fluorescenčnim barvilom SYBR Green.
Zanimivo je, da je novo metodo mogoče spremeniti za odkrivanje več drugih nalezljivih bolezni, ki jih povzročajo virusi RNA, na primer ebola, RSV itd.
Vir (i):
Carter et al (2020). Pod5-minutno odkrivanje RNA SARS-CoV-2 z uporabo reakcije eksponentne amplifikacije brez reverzne transkriptaze, RTF-EXPAR. Prednatis. Objavljeno na medRxiv Objavljeno 04. januarja 2021. DOI: https://doi.org/10.1101/2020.12.31.20248236
***
